1 適用范圍

　　聯(lián)合測(cè)試蘋果汁、杏仁醬和魚醬（0.5—2g/kg水平），風(fēng)色幻想5支線具有代表性的富含碳水化合物的漿狀物、富含脂肪和碳水化合物以及富含蛋白質(zhì)的食品。

　　2 原理概要

　　苯甲酸和山梨酸用***提取，并且接著在NaOH水溶液和CH2Cl2中進(jìn)行分配。酸從食品中分離出來，并轉(zhuǎn)變成三甲基硅 （TMS）酯，用GC測(cè)定。***和己酸分別用作苯甲酸和山梨酸的內(nèi)標(biāo)。

　　3 儀器和試劑

　　3.1 儀器

　�。╝）魯創(chuàng)GC-9860氣相色譜儀——使用線性程序升溫爐，火焰離子化檢測(cè)器和記錄儀�？刹捎孟铝袟l件：色譜柱，1.8m×2mm（內(nèi)徑）填有涂上3%OV-l的100—120目Varaport30載體的螺旋狀玻璃管。操作溫度：爐溫80—120℃，8℃/min，飚車世界會(huì)員中心進(jìn)樣室200℃，檢測(cè)器280℃。氮載氣流速20ml/min。己酸、山梨酸、苯甲酸和***的近似保留時(shí)間分別為2.5，4，5和6min。

　�。╞）離心機(jī)——帶30ml和200ml的離心瓶。

　�。╟）機(jī)械振蕩器——Bülher SM-B或同類產(chǎn)品。

　　3.2 試劑

　　在全部分析中使用分析純?cè)噭��?/p>

　　（a）內(nèi)標(biāo)溶液——將250mg***和250mg己酸溶解于100ml 3%KOH水溶液中。

　　（b）硅烷化試劑——N-甲基-N-三甲基硅烷-三氟乙酸胺 （MSTFA）。

　　（c）標(biāo)準(zhǔn)溶液——分別按下述濃度用CHCl3配制苯甲酸、山梨酸、***和己酸的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：

　　 1）200,200,750和750μg/ml

　　2）400,400,750和750μg/ml

　　3）600,600,750和750μg/ml

　　4）800,800,750和750μg/ml

　　5）1000,1000,750和750μg/ml

　　4 試驗(yàn)過程

　　4.1.樣品的制備

　　在機(jī)械混合器中將樣品混勻。如果由于樣品很稠而很難混勻，噬魂齒之爭(zhēng)可以用其它任何技術(shù)以確保樣品均勻。

　　4.2.提取

　　（a）一般方法——準(zhǔn)確稱取5.0g混勻的樣品，放進(jìn)帶有聚四氟乙烯襯螺帽的30ml離心管中。加入3.00ml內(nèi)標(biāo)液，1.5mlH2SO4（1+5），5g沙子和15ml***。擰緊螺帽，不能泄漏�，�械振蕩5min，然后在1500×g條件下離心10min。用移液管將***層移到250ml分液漏斗中，每次用15ml***，重復(fù)提取2次。

　　每次用l5ml0.5N NaOH和10ml飽和的NaCl溶液提取2次合并后的***相。收集水層，放入250ml分液漏斗中，加入2滴甲基橙，用HCl（1+1）酸化溶液到pH=1。分別用75,50和50ml的CH2Cl2連續(xù)提取。如果發(fā)生乳化，易烊千璽家境則加入10ml NaCl飽和溶液。通過裝有15g無水Na2SO4的過濾器傾析CH2Cl2提取液到250ml圓底燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于40℃蒸發(fā)CH2Cl2溶液至剛干。

（b）奶酪和糊狀粘稠的食品——精確稱取5.0g均勻樣品，放入200ml離心瓶。加入15ml水并用玻璃棒攪拌，沈陽(yáng)亂碼大樓直到樣品懸浮在水相中。加入3.00ml內(nèi)標(biāo)液，1.5mlH2S04（1+5）和25ml***。小心塞住離心瓶，檢查是否泄漏�，�械振蕩5min，然后在2000×g條件下離心10min。用移液管移取***層到250ml分液漏斗中。每次用25m1***重復(fù)提取2次。按 （a）中從 “提取合并后的***相”開始繼續(xù)操作。

　　4.3.衍生化氣相色譜

　　將10.0mlCHCl3加到盛有殘?jiān)��?50ml圓底燒瓶?jī)?nèi)。塞緊，用手搖2min。移取1.00mlCHCl3溶液到8ml帶聚四氟乙烯襯的螺帽的試管中，加入0.20ml硅烷化試劑。蓋好，在60℃烘箱內(nèi)或水浴上放置15min。重復(fù)進(jìn)樣1μl樣品液到氣相色譜儀內(nèi)，當(dāng)溶劑峰出現(xiàn)時(shí)，開始程序升溫。測(cè)量峰高和計(jì)算苯甲酸/***及山梨酸/己酸的峰高比。重復(fù)測(cè)定的峰高比使用平均值。重復(fù)進(jìn)樣的峰高比的差值應(yīng)≤5%。

　　4.4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

　　轉(zhuǎn)移1.00ml標(biāo)準(zhǔn)溶液到5個(gè)8ml帶聚四氟乙烯襯的螺帽的試管中。向每個(gè)試管內(nèi)加入0.20ml硅烷化試劑。蓋好，在60℃烘箱內(nèi)或水浴上放置15min。重復(fù)進(jìn)樣1μl標(biāo)準(zhǔn)溶液到色譜儀內(nèi)，使用和樣品溶液相同的條件。測(cè)量峰高和分別計(jì)算苯甲酸/***和山梨酸/己酸峰高比。重復(fù)進(jìn)樣的峰高比差值應(yīng)≤5%。以每個(gè)防腐劑重量比（x）對(duì)平均峰高比（y）作圖，用***小二乘法計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和截矩。

　　4.5.計(jì)算

　　防腐劑，mg/kg=[（y-a）/b]×（W'×W）×l000

　　式中，b=標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，a=截距，y=（防腐劑/內(nèi)標(biāo)）的峰高比的平均值，噬魂齒之爭(zhēng)W=以g為單位的樣品量，W'=以mg為單位的內(nèi)標(biāo)量。

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